Plasmide Double Nickase (h) FGF-3: sc-404553-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FGF-3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FGF-3 Double Nickase (h) et le plasmide FGF-3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FGF3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FGF-3 Antibody (MSD 1): sc-135
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FGF-3 | sc-404553-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) FGF-3 | sc-404553-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FGF3 code le facteur de croissance des fibroblastes 3 (FGF-3), un mitogène sécrété qui transmet ses signaux principalement via les récepteurs tyrosine kinases de la famille FGFR afin de réguler la mise en place des patrons embryonnaires, les interactions épithélio-mésenchymateuses et la morphogenèse tissulaire. L’activité en aval mobilise les voies canoniques des RTK, notamment les voies RAS–MAPK, PI3K–AKT et le signalement via PLCγ, influençant de manière dépendante du contexte la prolifération, la migration et la différenciation. Une expression dérégulée de FGF3 ou des altérations de son locus ont été associées à des programmes de développement anormaux et à une signalisation oncogénique dans certains types de tumeurs où l’activité de la voie FGFR est perturbée. En conséquence, FGF3 est fréquemment étudié dans des modèles de contrôle du destin cellulaire induit par des facteurs de croissance, de spécificité récepteur–ligand et de dialogue entre voies de signalisation.
FGF-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FGF3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FGF3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FGF3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FGF3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.