FEZF2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406571-ACT

FEZF2 (FEZ family zinc finger 2) kodiert einen Transkriptionsfaktor, der eine zentrale Rolle in der Neuroentwicklung spielt, indem er die Identität kortikaler Projektionsneurone festlegt und Programme für neuronale Differenzierung, Axonführung und kortikothalamische Konnektivität reguliert. Über seine Zinkfinger-DNA-Bindedomänen koordiniert FEZF2 genregulatorische Netzwerke, die die Musterbildung des Vorderhirns und die Reifung exzitatorischer neuronaler Linien prägen, und greift dabei in entwicklungsbezogene Signalwege sowie in chromatinabhängige Kontrolle der Transkription ein. Eine veränderte Regulation von FEZF2 wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird im Kontext einer fehlregulierten Ausbildung neuronaler Schaltkreise untersucht, die für komplexe Hirnerkrankungen relevant ist.

FEZF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FEZF2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FEZF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FEZF2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FEZF2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FEZF2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FEZF2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FEZF2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FEZF2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FEZF2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.