fetuin-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419056

概要

Ahsg は、肝臓由来で分泌される糖タンパク質である fetuin-A をコードしており、fetuin-A は血漿中を循環し、カルシウムおよびリン酸に結合することでミネラル代謝を調節する。これにより、カルシプロテイン粒子（calciprotein particles）の形成を介して異所性石灰化を抑制する。Fetuin-A はまた、炎症シグナル伝達や代謝恒常性にも影響し、インスリン受容体関連経路やマクロファージ活性化への作用を含むことから、全身性の急性期反応の文脈で研究されることが多い。マウスモデルでは、fetuin-A の量の変化が病的石灰化、代謝機能障害、組織リモデリングと関連づけられており、Ahsg は肝臓からの分泌、細胞外マトリックスのミネラル化、自然免疫過程のクロストークを解明するうえで有用な結節点となる。細胞外局在と幅広い結合能は、プロテオーム相互作用、血清因子の生物学、ならびに石灰化が起こりやすい微小環境の研究を後押しする。

fetuin-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAhsg遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ahsg内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ahsgのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、fetuin-Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、fetuin-Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ahsg欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• fetuin-Aの機能に不可欠なAhsgエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ahsgゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• fetuin-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびfetuin-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ahsg遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  fetuin-A HDRプラスミド（m）および fetuin-A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAhsgホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAhsg標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。