fetuin-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401125

概要

AHSGはフェツインAをコードしており、フェツインAは主として肝細胞で産生される分泌性糖タンパク質です。血漿中を循環し、ミネラル複合体やリポタンパク質複合体と会合します。フェツインAはカルシウムおよびリン酸に結合することで細胞外のミネラル恒常性を調節し、カルシプロテイン粒子の形成に影響を与えて異所性石灰化を制御します。また、TGF-β/BMPシグナル伝達とも相互作用し、骨形成分化プログラムの形成に関与します。多機能な血清タンパク質として、フェツインAは代謝性炎症、インスリンシグナル調節、マクロファージ応答の文脈でしばしば研究されており、AHSGの生物学を心代謝や石灰化関連の表現型と結び付けています。AHSG発現やフェツインA濃度の変化は、肝機能の変動や、動脈硬化性石灰化、慢性腎臓病におけるミネラルバランス異常、メタボリックシンドロームモデルに関連する全身性プロセスとの関連が報告されています。

fetuin-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAHSG遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AHSG内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AHSGのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、fetuin-Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、fetuin-Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AHSG欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• fetuin-Aの機能に不可欠なAHSGエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AHSGゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• fetuin-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびfetuin-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AHSG遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  fetuin-A HDRプラスミド（h）および fetuin-A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAHSGホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAHSG標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。