Plásmido CRISPR de Activación (m) Ferroportin-1: sc-424774-ACT

Slc40a1 codifica la ferroportina-1, el principal exportador celular de hierro que controla el eflujo de hierro desde enterocitos, macrófagos y hepatocitos para mantener la disponibilidad sistémica de hierro. La actividad de la ferroportina-1 está estrictamente regulada por el eje hepcidina–ferroportina, en el cual la unión de la hepcidina desencadena la internalización y degradación de la ferroportina, acoplando la exportación de hierro a señales inflamatorias y nutricionales. A través de estos procesos, Slc40a1 influye en la eritropoyesis, en las respuestas al estrés oxidativo y en el manejo del hierro por los macrófagos, conectando el tráfico de hierro con la señalización inmunitaria y la homeostasis metabólica. La desregulación de la exportación mediada por la ferroportina se estudia ampliamente en modelos de sobrecarga de hierro, anemia de la inflamación e interacciones huésped–patógeno, donde la restricción de hierro condiciona la aptitud microbiana y el daño tisular.

Ferroportin-1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Slc40a1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ferroportin-1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Slc40a1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Slc40a1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ferroportin-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Slc40a1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ferroportin-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ferroportin-1 en células tumorales con expresión de Slc40a1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.