Plasmide Double Nickase (h) Ferrochelatase: sc-402043-NIC

Le gène humain **FECH** code la ferrochélatase, l’enzyme terminale de la biosynthèse de l’hème, qui catalyse l’insertion du fer ferreux dans la protoporphyrine IX pour former l’hème dans la matrice mitochondriale. Cette activité soutient le métabolisme oxydatif en fournissant des groupements prosthétiques hème à l’hémoglobine, à la myoglobine, aux cytochromes, aux catalases et aux NO‑synthases. La fonction de FECH s’intègre au métabolisme mitochondrial du fer, au métabolisme des porphyrines et à l’homéostasie rédox, ce qui en fait un acteur central de la respiration cellulaire et de la gestion des espèces réactives de l’oxygène. Un dérèglement de FECH est associé à une accumulation de porphyrines et à des phénotypes de déficit en hème, notamment des porphyries héréditaires telles que la protoporphyrie érythropoïétique, et il est étudié dans des contextes d’anémie, de dysfonction mitochondriale et de stress cellulaire lié à la photosensibilité.

Ferrochelatase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FECH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FECH. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FECH. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FECH.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.