Plásmido Doble Nickase (h) FEN-1: sc-403168-NIC

El gen humano **FEN1** codifica la endonucleasa de solapa 1 (FEN-1), una nucleasa específica de estructura que escinde intermediarios de solapa 5′ generados durante la maduración de los fragmentos de Okazaki y la reparación por escisión de bases de parche largo. FEN-1 se coordina con PCNA, las ADN polimerasas y la ligasa I para mantener la integridad de la horquilla de replicación y la estabilidad del genoma, y contribuye al procesamiento de estructuras secundarias del ADN que surgen durante el estrés replicativo. La alteración de la función de FEN1 se asocia con un aumento de la señalización de daño en el ADN, la mutagénesis y la inestabilidad cromosómica, procesos que se estudian con frecuencia en biología del cáncer y en trastornos hereditarios del mantenimiento del genoma. Por ello, FEN-1 se utiliza ampliamente como un nodo modelo para estudiar la elección de vías de reparación del ADN, la reparación asociada a la replicación y las respuestas a agentes genotóxicos.

FEN-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FEN1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FEN1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FEN1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FEN1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.