FEM1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420316

概要

Fem1bは、ユビキチン依存的なプロテオスタシス（タンパク質恒常性）や細胞ストレス応答に関与するとされる、保存性の高いアンキリンリピート含有タンパク質FEM1Bをコードします。FEM1BはE3ユビキチンリガーゼ経路における基質認識に関連づけられており、アポトーシスおよび細胞周期関連プロセスの制御にも寄与し、その下流でミトコンドリア恒常性や代謝シグナル伝達に影響を及ぼします。マウス系では、Fem1bの機能はエネルギーバランス、内分泌調節、組織維持などの文脈で研究されており、代謝機能障害やストレス適応型表現型の機序解明研究において重要です。FEM1B活性の変化は、タンパク質品質管理ネットワークの変動とも関連し、変性疾患モデルや代謝疾患モデルに対する感受性に影響し得ることも示唆されています。

FEM1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFem1b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Fem1b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Fem1bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FEM1Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FEM1Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Fem1b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FEM1Bの機能に不可欠なFem1bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Fem1bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FEM1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFEM1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Fem1b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FEM1B HDRプラスミド（m）および FEM1B HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFem1bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFem1b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。