FBXO6 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-405919-ACT-2

ヒトFBXO6はFボックス型タンパク質をコードしており、SCF（SKP1–CUL1–RBX1）E3ユビキチンリガーゼ複合体における基質認識コンポーネントとして、標的タンパク質をユビキチン化およびプロテアソームによる分解へと結び付ける。FBXO6はとりわけ小胞体関連分解（ERAD）でよく研究されており、レクチン様の相互作用を介してミスフォールドした糖タンパク質を認識し、その除去を促進することで、プロテオスタシス、ERストレスシグナル伝達、ならびに分泌・膜タンパク質の品質管理に影響を及ぼす。これらの機能を通じてFBXO6は、タンパク質のフォールディング、ユビキチン依存的な制御、細胞ストレス応答を司る経路と交差し、がん生物学、代謝・炎症関連の表現型、異常なタンパク質恒常性に伴う疾患との関連も報告されている。さらに、FBXO6の遺伝子編集や機能攪乱は、SCFリガーゼにおける基質特異性、ERADの動態、そしてユビキチン介在性タンパク質品質管理の変化がもたらす下流の転写応答やシグナル伝達への影響について、ヒト細胞モデルで機構的に検討することを可能にする。

FBXO6 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FBXO6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FBXO6 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における FBXO6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFBXO6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FBXO6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFBXO6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFBXO6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFBXO6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFBXO6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。