Plásmido CRISPR de Activación (h2) FBXO6: sc-405919-ACT-2

El gen humano FBXO6 codifica una proteína F-box que actúa como componente de reconocimiento de sustratos de los complejos ligasa E3 de ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–RBX1), acoplando proteínas diana a su ubiquitinación y a su degradación por el proteasoma. FBXO6 se caracteriza principalmente por su papel en la degradación asociada al retículo endoplásmico (ERAD), donde reconoce glucoproteínas mal plegadas mediante interacciones tipo lectina y promueve su eliminación, influyendo así en la proteostasis, la señalización del estrés del retículo endoplásmico y el control de calidad de proteínas secretoras y de membrana. A través de estas funciones, FBXO6 se cruza con vías que controlan el plegamiento proteico, la regulación dependiente de ubiquitina y las respuestas celulares al estrés, con vínculos descritos con la biología del cáncer, fenotipos metabólicos e inflamatorios y trastornos asociados a una homeostasis proteica aberrante. La edición génica o la perturbación de FBXO6 permite estudios mecanísticos sobre la especificidad de sustrato dentro de las ligasas SCF, la dinámica de ERAD y las consecuencias transcripcionales y de señalización aguas abajo derivadas de alterar el control de calidad proteico mediado por ubiquitina en modelos celulares humanos.

FBXO6 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FBXO6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FBXO6 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FBXO6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FBXO6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FBXO6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FBXO6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FBXO6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FBXO6 en células tumorales con expresión de FBXO6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.