FBXO30 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402735-ACT

FBXO30はF-boxタンパク質をコードしており、SCF（SKP1–CUL1–F-box）型E3ユビキチンリガーゼ複合体において基質認識を担う構成要素として機能し、標的タンパク質をユビキチン依存的なプロテアソーム分解へと結び付けます。この役割を通じてFBXO30は、主要なシグナル経路エフェクターの安定性を調節することで、タンパク質恒常性、細胞周期の進行、ストレス応答性シグナル伝達の制御に寄与します。ユビキチン‐プロテアソーム系の活性変化は、がん化シグナル、炎症状態、変性表現型と広く関連しているため、FBXO30の発現と機能はこれらの文脈における機構研究において重要です。ヒト細胞モデルでは、FBXO30を操作することで、プロテオスタシス・ネットワークや下流の転写出力および表現型を解析するための手がかりが得られます。

FBXO30 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FBXO30の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FBXO30 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FBXO30 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFBXO30転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FBXO30の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFBXO30遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFBXO30依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFBXO30発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFBXO30経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。