Plásmido CRISPR de Activación (h) FBXO30: sc-402735-ACT

FBXO30 codifica una proteína de la familia F-box que actúa como componente de reconocimiento de sustratos de los complejos ligasa E3 de ubiquitina tipo SCF (SKP1–CUL1–F-box), acoplando proteínas diana a su degradación proteasomal dependiente de ubiquitina. A través de esta función, FBXO30 contribuye a la regulación de la homeostasis proteica, la progresión del ciclo celular y la señalización sensible al estrés, al modular la estabilidad de efectores clave de distintas vías. La actividad alterada del sistema ubiquitina–proteasoma se ha relacionado ampliamente con señalización oncogénica, estados inflamatorios y fenotipos degenerativos, lo que hace que la expresión y la función de FBXO30 sean relevantes para estudios mecanísticos en estos contextos. En modelos celulares humanos, la modulación de FBXO30 ofrece una herramienta para investigar redes de proteostasis y sus consecuencias transcripcionales y fenotípicas.

FBXO30 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FBXO30 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FBXO30 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FBXO30 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FBXO30, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FBXO30. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FBXO30 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FBXO30 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FBXO30 en células tumorales con expresión de FBXO30 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.