FBXO3 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-425412-ACT

Das murine Gen **Fbxo3** kodiert **FBXO3**, einen F-Box-Substratrezeptor innerhalb von **SCF-(SKP1–CUL1–F-Box)-E3-Ubiquitin-Ligasekomplexen**, der zur Spezifität des ubiquitinabhängigen proteasomalen Abbaus beiträgt. Durch den regulierten Abbau von Signalproteinen trägt FBXO3 zur Kontrolle entzündlicher und stressresponsiver Signalwege bei, einschließlich der angeborenen Immunantwort und der Zytokinproduktion. Eine veränderte FBXO3-Aktivität wurde mit fehlregulierter Entzündung und gestörter Immunhomöostase in Verbindung gebracht, was es für Studien zur Infektionsbiologie, zu chronisch-entzündlichen Phänotypen und zu zelltypspezifischen Signal-Schwellenwerten relevant macht. Als Teil der Schaltkreise des Ubiquitin–Proteasom-Systems ist **Fbxo3** zudem nützlich, um zu untersuchen, wie Proteinstabilität mit Transkriptionsprogrammen und posttranslationaler Regulation zusammenwirkt.

FBXO3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Fbxo3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FBXO3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Fbxo3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Fbxo3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FBXO3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Fbxo3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FBXO3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FBXO3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Fbxo3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.