Plásmido CRISPR de Activación (h) FBXO10: sc-406159-ACT

FBXO10 codifica una proteína de tipo F-box que funciona como componente de reconocimiento de sustratos de los complejos ligasa de ubiquitina E3 SCF (SKP1–CUL1–F-box), dirigiendo proteínas específicas hacia su ubiquitinación y su degradación dependiente del proteasoma. Mediante la degradación regulada de proteínas, FBXO10 contribuye al control de la intensidad de la señalización, de los programas del ciclo celular y de respuesta al estrés, y al mantenimiento de la proteostasis. La señalización de ubiquitina mediada por SCF desregulada y la actividad alterada de FBXO10 se han vinculado con señales de supervivencia aberrantes y con la biología linfoide, lo que respalda su relevancia en estudios de apoptosis, amortiguación de vías oncogénicas y homeostasis de células inmunitarias. Por ello, FBXO10 resulta de interés para diseccionar la conectividad del sistema ubiquitina–proteasoma y la regulación dependiente del contexto de nodos clave de las vías de señalización.

FBXO10 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FBXO10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FBXO10 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FBXO10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FBXO10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FBXO10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FBXO10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FBXO10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FBXO10 en células tumorales con expresión de FBXO10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.