Plasmide CRISPR d'Activation (h) Fatty Acid Synthase: sc-400440-ACT

Le gène humain **FASN** code la synthase des acides gras, un complexe enzymatique cytosolique multifonctionnel qui catalyse la synthèse de novo d’acides gras saturés à longue chaîne, principalement le palmitate, à partir d’acétyl‑CoA et de malonyl‑CoA en utilisant le NADPH. Cette activité s’intègre au métabolisme de l’acétyl‑CoA, à la navette du citrate et aux voies de production de NADPH afin de soutenir la biogenèse membranaire, la palmitoylation des protéines et la signalisation dérivée des lipides. La régulation de FASN est étroitement liée à la détection des nutriments et aux programmes transcriptionnels lipogéniques, notamment via un contrôle dépendant de SREBP, et elle contribue aux réponses cellulaires à l’hypoxie et au stress oxydant par le remodelage lipidique. L’expression altérée de FASN et la lipogenèse sont fréquemment étudiées dans des contextes de dysfonction métabolique et de biologie des maladies prolifératives, où la disponibilité en lipides peut influencer la croissance, la tolérance au stress et la signalisation inflammatoire.

Fatty Acid Synthase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FASN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Fatty Acid Synthase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FASN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FASN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Fatty Acid Synthase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FASN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Fatty Acid Synthase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Fatty Acid Synthase dans les cellules tumorales présentant une expression de FASN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.