Plásmido CRISPR de Activación (h) FAT2: sc-402931-ACT

El gen humano **FAT2** codifica una proteína atípica similar a las cadherinas de la familia FAT, implicada en la adhesión célula–célula, la polaridad planar y la regulación de la organización del citoesqueleto. La señalización asociada a FAT2 se integra con procesos que dan forma a la arquitectura epitelial, la migración direccional y la morfogénesis tisular, vinculándola con vías que gobiernan el establecimiento de la polaridad y la integridad de las uniones celulares. La actividad alterada de la familia FAT se ha asociado con un control del crecimiento desregulado y fenotipos invasivos en múltiples contextos patológicos, lo que respalda investigar FAT2 en mecanobiología y homeostasis epitelial. Por ello, FAT2 es relevante para estudios de señalización dependiente de la polaridad, organización de membrana y programas transcripcionales vinculados a la adhesión.

FAT2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FAT2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FAT2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FAT2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FAT2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FAT2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FAT2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FAT2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FAT2 en células tumorales con expresión de FAT2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.