FAM123A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404231

概要

AMER2（FAM123A）は細胞質タンパク質で、Wnt/β-カテニンシグナル伝達や細胞極性に関連するプロセスの制御に関与し、膜近傍のシグナルを下流の転写プログラムへとつなぐことで、増殖や分化に影響を与えます。β-カテニン制御ネットワークの構成要素を調節することにより、FAM123Aは接着や細胞骨格の組織化にも影響し、上皮組織の構築に作用する可能性があります。Wnt経路活性の変化は発生生物学およびがん化（腫瘍化）に広く関与するため、AMER2はシグナル状態への依存性を解析するうえで有用な切り口となります。AMER2/FAM123Aに関する研究は、経路間クロストークの機構解析、状況依存的な転写出力の解明、ならびにヒト細胞モデルにおける遺伝子型—表現型関係の検討を支えます。

FAM123A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAMER2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AMER2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AMER2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FAM123Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FAM123Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AMER2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FAM123Aの機能に不可欠なAMER2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AMER2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FAM123A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFAM123A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AMER2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FAM123A HDRプラスミド（h）および FAM123A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAMER2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAMER2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。