Factor XIII B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403574-ACT

F13B kodiert die B‑Untereinheit des Gerinnungsfaktors XIII, einen Bestandteil eines plasmaassoziierten Transglutaminase‑Komplexes, der als A2B2‑Heterotetramer zirkuliert und die katalytische A‑Untereinheit im Blutkreislauf stabilisiert. Nach Aktivierung durch Thrombin und Bindung von Calcium vernetzt Faktor XIIIa Fibrin und andere Matrixproteine, stärkt dadurch die Gerinnselarchitektur und erhöht die Resistenz gegenüber der Fibrinolyse. Über diese extrazellulärmatrix‑stabilisierenden Reaktionen trägt Faktor‑XIII‑B zur Hämostase und zu Remodelling‑Prozessen im Rahmen der Wundheilung bei. Ein verändertes Gleichgewicht der FXIII‑Untereinheiten und eine reduzierte FXIII‑Aktivität sind mit Blutungsphänotypen und einer abnormen Gerinnselstabilität verbunden, wodurch F13B ein relevantes Ziel für mechanistische Studien in der Gerinnungsbiologie darstellt.

Factor XIII B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen F13B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Factor XIII B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des F13B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der F13B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Factor XIII B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native F13B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Factor XIII B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Factor XIII B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem F13B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.