Plasmide CRISPR d'Activation (h) Factor VII: sc-402582-ACT

Le gène humain **F7** code le facteur de coagulation VII, un zymogène de sérine protéase dépendant de la vitamine K, synthétisé principalement par les hépatocytes et sécrété dans le plasma. Après liaison au facteur tissulaire (**F3**) au niveau des sites de lésion vasculaire, le facteur VII activé (VIIa) initie la voie extrinsèque de la coagulation en activant par protéolyse le facteur X (**F10**) et le facteur IX (**F9**), amplifiant ainsi la génération de thrombine et la formation de fibrine. Cette voie interagit avec la biologie endothéliale et plaquettaire et peut signaler via les récepteurs activés par les protéases (PAR) pour moduler l’inflammation vasculaire et l’équilibre hémostatique. Une activité ou une expression dérégulée de **F7** est associée à des phénotypes hémorragiques et à un risque thrombotique, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier la régulation des voies de coagulation et les relations génotype–phénotype.

Factor VII Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de F7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Factor VII Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus F7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription F7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Factor VII. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus F7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Factor VII au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Factor VII dans les cellules tumorales présentant une expression de F7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.