Plásmido Doble Nickase (h) Factor H: sc-401099-NIC

El factor H del complemento (CFH) codifica el Factor H, un regulador soluble de la vía alternativa del complemento que protege las superficies del huésped al acelerar la disociación de la convertasa de C3 y actuar como cofactor para la escisión de C3b mediada por el factor I. Al unirse a C3b, polianiones y glicosaminoglicanos en las membranas propias, el Factor H limita la amplificación del complemento, modula la opsonización y restringe la señalización inflamatoria posterior. La variación genética o la desregulación de CFH se asocia con lesión tisular mediada por el complemento y una activación innata aberrante, con gran relevancia para trastornos de la retina y del riñón, así como para fenotipos inflamatorios sistémicos. Como punto de control central en la homeostasis del complemento, CFH se estudia ampliamente en vías que regulan la inmunidad extracelular, la integridad endotelial y el manejo de complejos inmunes.

Factor H El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CFH en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CFH. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CFH. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CFH alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.