Plásmido Doble Nickase (m) FA2H: sc-436124-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)FA2H consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa FA2H (m) y el plásmido de doble nickasa FA2H (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Fa2h. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) FA2H | sc-436124-NIC | 20 µg | $410.00 |
Fa2h codifica la 2-hidroxilasa de ácidos grasos (FA2H), una enzima asociada al retículo endoplásmico que cataliza la 2-hidroxilación de ácidos grasos de cadena larga, un paso clave para generar esfingolípidos 2-hidroxilados y galactosilceramidas. Estos lípidos contribuyen a la organización de las membranas y a la estabilidad de la mielina, lo que vincula la actividad de FA2H con el metabolismo de los esfingolípidos, la biología de los oligodendrocitos y las interacciones axón–glía. La alteración de la función de FA2H se ha asociado con trastornos en la composición lipídica de la mielina y con fenotipos neurodegenerativos, por lo que resulta relevante para estudiar la homeostasis lipídica en el sistema nervioso. En modelos murinos, la perturbación de Fa2h se utiliza con frecuencia para investigar los mecanismos de la mielinización, la dinámica de membranas y las respuestas de estrés celular dependientes de lípidos.
FA2H El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Fa2h en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Fa2h. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Fa2h. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Fa2h alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.