F-Spondin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-433292

概要

Spon1はF-Spondinをコードしており、F-Spondinは細胞外マトリックス（ECM）に関連する糖タンパク質で、中枢神経系の発生および再編（リモデリング）の過程において、軸索誘導やニューロン接着の手がかり（キュー）として機能します。F-Spondinは細胞表面受容体やプロテオグリカンと相互作用し、神経突起の伸長、細胞移動、シナプスの組織化を調節します。また、ECMシグナル伝達や、プロテアーゼ依存的なマトリックス再構築プロセスと関連づけられることが一般的です。マウス組織では、SPON1の発現は、神経発生におけるパターニングや損傷に伴う可塑性の基盤となる経路、ならびに血管性および炎症性の微小環境変化を調べるために用いられてきました。SPON1/F-Spondinの生物学的特性の変化は、神経学的および神経変性に関連する表現型の文脈で検討されており、ECM依存的なシグナル伝達が神経回路の結合性や組織恒常性の形成に影響し得ることが示されています。

F-Spondin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSpon1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Spon1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Spon1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、F-Spondinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、F-Spondinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Spon1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• F-Spondinの機能に不可欠なSpon1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Spon1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• F-Spondin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびF-Spondin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Spon1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  F-Spondin HDRプラスミド（m）および F-Spondin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSpon1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSpon1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。