F-Spondin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404101

概要

SPON1はF-spondinをコードする遺伝子である。F-spondinは細胞外マトリックス（ECM）関連の分泌性糖タンパク質で、神経系に豊富に存在し、発生や組織リモデリングの過程において、細胞—マトリックス相互作用、神経突起の伸長、軸索ガイダンスを調節する。F-spondinは、インテグリンやプロテオグリカン依存性シグナル伝達に関与し、さらにECMの構造を整えることで、細胞の接着および遊走に影響を与えうる。シナプス結合性や神経可塑性の制御との関連も示されており、神経変性や損傷に伴うリモデリングといった状況でSPON1発現の変化が報告されている。ECM由来の手掛かり因子としてのF-spondinは、マトリックスシグナルや細胞運動が重要となる血管系および線維化プロセスにおける役割についても研究されている。

F-Spondin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSPON1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SPON1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SPON1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、F-Spondinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、F-Spondinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SPON1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• F-Spondinの機能に不可欠なSPON1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SPON1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• F-Spondin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびF-Spondin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SPON1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  F-Spondin HDRプラスミド（h）および F-Spondin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSPON1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSPON1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。