EYA1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-404056-LAC

Humanes EYA1 (eyes absent homolog 1) kodiert einen transkriptionellen Koaktivator und eine zur Haloacid-Dehalogenase-Familie gehörende Phosphatase, die entwicklungsbezogene Transkriptionsprogramme mit der Phosphotyrosin-Signalübertragung koppelt. EYA1 wirkt zusammen mit SIX-Homeobox-Proteinen und DACH-Faktoren und reguliert so Organogenese, Festlegung von Zellschicksalen und epitheliale Differenzierung; dabei ist es in genregulatorische Netzwerke eingebunden, die die Morphogenese steuern. Über seine Phosphataseaktivität und Koaktivatorfunktionen beeinflusst EYA1 Prozesse wie den Erhalt von Vorläuferzellen, Migration und DNA-Schadensantworten. Eine fehlregulierte EYA1-Aktivität oder -Expression ist mit angeborenen Entwicklungsstörungen assoziiert und wurde mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die für die Tumorbiologie relevant sind, was EYA1 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der Transkriptionskontrolle macht.

EYA1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente EYA1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

EYA1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der EYA1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen EYA1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen EYA1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.