EXT1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404635-NIC

EXT1 kodiert Exostosin-1, eine im Golgi-Apparat lokalisierte Glykosyltransferase, die mit EXT2 einen hetero-oligomeren Komplex bildet, um die Polymerisation von Heparansulfat-Ketten auf Proteoglykan-Kernproteinen zu katalysieren. Durch die Kontrolle der Heparansulfat-Biosynthese prägt EXT1 die Organisation der extrazellulären Matrix und moduliert Verteilung und Signalgebung heparinbindender Liganden; dadurch beeinflusst es Signalwege wie FGF, WNT, Hedgehog und BMP. Eine veränderte EXT1-Funktion stört Sulfatierungsmuster von Proteoglykanen sowie Ligand–Rezeptor-Interaktionen, die Entwicklung, Morphogenese und die Zell–Matrix-Kommunikation regulieren. Keimbahn- und somatische Veränderungen in EXT1 sind mit abnormem Skelettwachstum und tumorassoziierten Phänotypen verbunden und machen EXT1 zu einem geeigneten Knotenpunkt für die Untersuchung der Glykobiologie und signalabhängiger Zellverhalten.

EXT1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EXT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EXT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EXT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EXT1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.