Plásmido Doble Nickase (h) Exo1: sc-402356-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Exo1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Exo1 (h) y el plásmido de doble nickasa Exo1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a EXO1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Exo1 | sc-402356-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Exo1 | sc-402356-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EXO1 codifica Exo1, una exonucleasa 5′→3′ específica de estructura que participa en la resección de extremos de ADN durante la recombinación homóloga y en el procesamiento de horquillas de replicación detenidas. También contribuye a la reparación de desajustes al coordinarse con componentes de la vía MutS/MutL para escindir ADN mal apareado, manteniendo así la estabilidad del genoma. A través de estas actividades, EXO1 influye en la señalización de los puntos de control del ciclo celular, las respuestas al estrés replicativo y la resolución de intermediarios de recombinación. La alteración de la función o la expresión de EXO1 se ha asociado con fenotipos mutadores e inestabilidad genómica observados en múltiples contextos relacionados con el cáncer, lo que respalda su utilidad como nodo mecanístico en la investigación de la reparación del ADN.
Exo1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EXO1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EXO1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EXO1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EXO1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.