Evi-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404112

概要

MECOMは転写因子Evi-1をコードしており、Evi-1は亜鉛フィンガー型のDNA結合タンパク質として、造血幹細胞および前駆細胞の維持、系譜決定、細胞分化を制御する遺伝子発現プログラムを調節します。Evi-1は、TGF-β/SMADシグナル伝達、PI3K–AKT経路、クロマチンリモデリングと交差する転写・エピジェネティックネットワークに関与し、増殖と生存を制御します。MECOM/Evi-1の活性が破綻すると、転写制御の異常を通じて異常な自己複製能や分化障害を引き起こし、血液悪性腫瘍としばしば関連します。さらに血液の発生に加えて、MECOMは発生過程や、複数の組織環境における形質転換および転移形質に関わる腫瘍性の転写回路にも関与すると示唆されています。

Evi-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMECOM遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MECOM内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MECOMのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Evi-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Evi-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MECOM欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Evi-1の機能に不可欠なMECOMエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MECOMゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Evi-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびEvi-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MECOM遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Evi-1 HDRプラスミド（h）および Evi-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMECOMホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMECOM標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。