Plásmido Doble Nickase (h) ETEA: sc-403730-NIC

FAF2 codifica la proteína ETEA residente en el retículo endoplásmico (también conocida como UBXD8), un adaptador con dominio UBX que conecta sustratos ubiquitinados con la ATPasa p97/VCP para promover la degradación asociada al RE (ERAD). Mediante su coordinación con ligasas de ubiquitina de la membrana del RE y con la maquinaria asociada a las gotas lipídicas, ETEA influye en la proteostasis, las respuestas al estrés por proteínas mal plegadas y el metabolismo lipídico, incluido el recambio de reguladores clave de la homeostasis de ácidos grasos y esteroles. La alteración de la actividad de FAF2/ETEA se ha relacionado con una señalización del estrés del RE desregulada y con la remodelación metabólica observada en contextos como la adaptación de células cancerosas y trastornos hepáticos de lípidos, lo que la hace relevante para estudiar la tolerancia al estrés y la regulación de los lípidos de membrana.

ETEA El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FAF2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FAF2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FAF2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FAF2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.