Plasmide CRISPR d'Activation (m) Estrogen Receptor alpha: sc-418925-ACT

Le gène murin *Esr1* code le récepteur des œstrogènes alpha (ERα), un récepteur nucléaire activé par ligand qui agit comme facteur de transcription en coordonnant des programmes géniques dépendants des œstrogènes. Après liaison hormonale, ERα se fixe aux éléments de réponse aux œstrogènes et recrute des complexes de co‑régulateurs afin de moduler l’accessibilité de la chromatine et la transcription, tout en dialoguant avec les voies de signalisation MAPK/ERK, PI3K/AKT et celles des facteurs de croissance. L’activité d’ERα influence la progression du cycle cellulaire, la différenciation, le métabolisme et des états transcriptionnels liés à l’immunité, faisant de *Esr1* un nœud central de la régulation endocrinienne. Une signalisation d’ERα dérégulée est largement utilisée comme cadre moléculaire pour étudier les phénotypes hormono‑dépendants et la reprogrammation transcriptionnelle pertinente pour les maladies dans les systèmes mammifères.

Estrogen Receptor alpha Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Esr1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Estrogen Receptor alpha Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Esr1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Esr1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Estrogen Receptor alpha. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Esr1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Estrogen Receptor alpha au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Estrogen Receptor alpha dans les cellules tumorales présentant une expression de Esr1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.