ERRβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424021

概要

エストロゲン関連受容体β（ERRβ）は、マウスのEsrrb遺伝子にコードされるオーファン核内受容体であり、エネルギー代謝、ミトコンドリア機能、ならびに細胞運命決定に関与する遺伝子プログラムを統括する転写因子として機能する。多能性細胞においてEsrrbは自己複製能の維持に寄与し、分化および系譜決定を制御する中核的な転写ネットワークと相互作用する。ERRβの活性はステロイドホルモン受容体シグナル伝達や、酸化的経路および発生関連経路に対するより広範な転写制御と関連している。Esrrb依存的転写の破綻は、発生の帰結の変化や、状況依存的な細胞増殖・代謝状態の変動と関連づけられており、疾患関連モデルにおける機構的ハブとしての利用を支持する。

ERRβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEsrrb遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Esrrb内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Esrrbのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ERRβタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ERRβシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Esrrb欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ERRβの機能に不可欠なEsrrbエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Esrrbゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ERRβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびERRβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Esrrb遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ERRβ HDRプラスミド（m）および ERRβ HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEsrrbホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEsrrb標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。