Plasmide Double Nickase (h) ERM: sc-401161-NIC

ETV5 code le facteur de transcription de la famille ETS ERM, une protéine nucléaire liant l’ADN qui régule des programmes d’expression génique impliqués dans les décisions de destinée cellulaire, la prolifération et la migration. ERM agit en aval de la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase, notamment des voies FGF/MAPK, et intègre des signaux du développement et du remodelage tissulaire en contrôlant la transcription de cibles associées à la croissance et à la différenciation. Une dérégulation de l’activité d’ETV5 a été associée à des dynamiques épithélio-mésenchymateuses altérées, à des états transcriptionnels liés à l’invasion et à une plasticité de lignée dans plusieurs contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le recâblage des réseaux transcriptionnels. En tant que régulateur spécifique de séquence, ERM constitue également un modèle accessible pour analyser la coopérativité des facteurs ETS, l’utilisation des enhancers et le contrôle de la transcription dépendant de la chromatine.

ERM Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ETV5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ETV5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ETV5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ETV5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.