ERdj4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410882-ACT

ヒトDNAJB9はERdj4をコードしており、ERdj4は小胞体（ER）内腔に局在するHsp40/DnaJファミリーの共シャペロンで、BiP/GRP78のATPアーゼ活性を刺激することで、タンパク質フォールディングの品質管理を支えます。ERdj4はERストレス時に誘導され、シャペロン介在性のフォールディングを小胞体関連分解（ERAD）へと結び付けてプロテオトキシシティを抑えることで、アンフォールデッド・プロテイン・レスポンス（UPR）プログラムに寄与します。これらの機能を通じて、DNAJB9はプロテオスタシス、分泌経路の恒常性、ならびにストレス適応的な転写ネットワークの制御に関与します。ERdj4を含むERのプロテオスタシス異常やUPRシグナルの破綻は、研究レベルにおいて、炎症、代謝機能障害、タンパク質ミスフォールディング表現型（神経変性やがん生物学に関連）との関連が示されています。

ERdj4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DNAJB9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ERdj4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DNAJB9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDNAJB9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ERdj4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDNAJB9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるERdj4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDNAJB9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるERdj4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。