ERBIN CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402637-ACT

ERBIN (ERBB2 interacting protein) ist ein PDZ-Domänen-haltiges Gerüstprotein, das an basolateralen Membranen lokalisiert und die Assemblierung von Rezeptorkomplexen, deren Transport (Trafficking) und die Weiterleitung von Signalen koordiniert. Es moduliert die Output-Signale der ERBB2/EGFR-Signalkaskade und greift in MAPK- und PI3K-Signalwege ein, indem es membrannahe Signalplattformen organisiert und Rezeptoren mit nachgeschalteten Effektoren koppelt. ERBIN beeinflusst zudem die epitheliale Polarität und die Organisation von Zell-Zell-Kontakten durch Interaktionen mit Regulatoren von Polarität und Adhäsion und prägt so Zellarchitektur und Signaltreue. Eine dysregulierte ERBIN-Expression oder eine veränderte Gerüstfunktion wird mit aberranter Wachstumsfaktor-Signalgebung und Polaritätsdefekten in Verbindung gebracht, die für mechanistische Studien in der Onkologie und anderen epithelialen Pathologien relevant sind.

ERBIN Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ERBIN-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ERBIN Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ERBIN-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ERBIN-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ERBIN-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ERBIN-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ERBIN-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ERBIN-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ERBIN-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.