EphB2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401642-ACT

EPHB2 codifica a tirosina-quinase receptora humana EphB2, membro do sistema de sinalização Eph/ephrina, que medeia a comunicação dependente de contacto e controla o posicionamento celular, a formação de fronteiras e a orientação axonal. A ativação de EphB2 por ligandos efrina-B regula a remodelação do citoesqueleto, a dinâmica de adesão e a migração por vias que envolvem GTPases da família Rho, sinalização MAPK e redes relacionadas com PI3K. Em tecidos de mamíferos, EphB2 contribui para a padronização do desenvolvimento e para a manutenção da arquitetura epitelial, e a sinalização desregulada de EphB2 tem sido implicada em alterações de invasividade e de estados de diferenciação na biologia do cancro. EPHB2 também é estudado no contexto de processos do neurodesenvolvimento e da organização sináptica, nos quais interações graduais entre recetor e ligando influenciam a formação de circuitos.

EphB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EPHB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EphB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EPHB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EPHB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EphB2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EPHB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EphB2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EphB2 em células tumorais com expressão de EPHB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.