Plásmido CRISPR de Activación (h) EphB1: sc-401429-ACT

EPHB1 codifica EphB1, una tirosina cinasa receptora para ligandos efrina-B que media señalización dependiente de contacto y controla la adhesión y repulsión celular, así como la formación de límites. La señalización de EphB1 activa vías bidireccionales de efrina e interseca con la regulación de GTPasas de la familia Rho, las cascadas MAPK/ERK y la remodelación del citoesqueleto para coordinar la migración, la guía axonal y el patrón tisular. En biología humana, la desregulación de la señalización Eph/efrina se estudia con frecuencia en el contexto de cambios en el posicionamiento celular, el comportamiento invasivo y programas de desarrollo aberrantes. Por ello, EPHB1 es relevante para investigaciones mecanísticas de redes de tirosina cinasas receptoras que moldean las interacciones con el microambiente y el cambio de fenotipo.

EphB1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EPHB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EphB1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EPHB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EPHB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EphB1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EPHB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EphB1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EphB1 en células tumorales con expresión de EPHB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.