Plasmide Double Nickase (m) EphA3: sc-420193-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) EphA3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide EphA3 Double Nickase (m) et le plasmide EphA3 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Epha3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: EphA3 Antibody (D-2): sc-514209
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) EphA3 | sc-420193-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) EphA3 | sc-420193-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Epha3** code **EphA3**, une tyrosine kinase réceptrice de la famille **Eph/éphrine** qui assure une signalisation dépendante du contact afin de coordonner le positionnement cellulaire, la formation de frontières et la mise en place des tissus. Lors de la liaison d’un ligand éphrine‑A, EphA3 déclenche une signalisation bidirectionnelle qui remodèle le cytosquelette d’actine et module l’adhérence et la migration via des voies impliquant les GTPases de la famille Rho, la signalisation MAPK et la dynamique des adhésions focales. L’activité d’EphA3 influence le développement neural et vasculaire et a été associée à des altérations de la motilité cellulaire et des programmes de différenciation dans des contextes pertinents pour les maladies. Ces caractéristiques font d’Epha3 une cible utile pour analyser comment la signalisation des récepteurs Eph s’intègre aux signaux du microenvironnement pour réguler le comportement cellulaire.
EphA3 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Epha3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Epha3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Epha3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Epha3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.