Epac Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (r): sc-437373
- alvos específicos: rat
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Epac O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (r) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Epac, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Epac Anticorpo (A-5): sc-28366
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Epac Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (r) | sc-437373 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Epac (Proteína de Troca Diretamente Ativada por AMPc; família RAPGEF3/RAPGEF4) é um fator de troca de nucleotídeos de guanina responsivo ao AMPc que ativa Rap1 e Rap2 de forma independente da PKA. Por meio da sinalização das GTPases Rap, a Epac regula a adesão mediada por integrinas, a remodelação do citoesqueleto, o tráfego vesicular e as propriedades da barreira endotelial, influenciando a migração celular e a estabilidade das junções. As vias de AMPc dependentes de Epac também interagem com a sinalização MAPK/ERK e PI3K-AKT para modular respostas inflamatórias e a sinalização de estresse celular. A desregulação da sinalização Epac-Rap tem sido implicada em processos cardiovasculares e neurobiológicos, incluindo alterações na permeabilidade vascular e na excitabilidade neuronal, sustentando seu uso como alvo mecanístico em modelos de rato relevantes para doenças.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Epac (r) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene em linhas celulares rat. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do , juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Epac.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de para a investigação da sinalização de Epac, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) críticos para a função Epac
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Epac Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (r) e pelo Epac Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (r2) têm como alvo locais distintos dentro do locus . Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Epac Plasmídeo HDR (r) e o Plasmídeo HDR Epac (r2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.