Ep-CAM Lentiviral Activation Particles (m): sc-421499-LAC

Mouse Epcam kodiert Ep-CAM, ein transmembranöses Glykoprotein, das an epithelialen Zell-Zell-Kontakten angereichert ist und zur Adhäsion, epithelialen Polarität und Organisation der Barriere beiträgt. Ep-CAM ist in Programme des junctionalen und zytoskelettalen Remodellings eingebunden und mit proliferativen Signalnetzwerken verknüpft, darunter Signalwege, die die epitheliale Homöostase und stammzellähnliche Zellzustände koordinieren. Eine veränderte EPCAM-Expression wird häufig als Marker der epithelialen Linie und phänotypischer Übergänge verwendet, einschließlich Veränderungen, die in der Krebsbiologie mit Invasion und Differenzierungsstatus assoziiert sind. In Mausmodellen wird Epcam breit in der Entwicklungsbiologie, der Geweberegeneration und in epithelial abgeleiteten Tumorsystemen untersucht, um zu verstehen, wie adhäsionsgekoppelte Signalgebung die zelluläre Identität prägt.

Ep-CAM Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Epcam-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Ep-CAM Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Epcam-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Ep-CAM-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Epcam-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.