Ep-CAM Lentiviral Activation Particles (h): sc-400220-LAC

EPCAM kodiert das epitheliale Zelladhäsionsmolekül (Ep-CAM), ein transmembranöses Glykoprotein, das an epithelialen Zell-Zell-Kontakten angereichert ist und zur Gewebearchitektur, Polarität und regulierten Proliferation beiträgt. Über seine Adhäsionsfunktion hinaus ist Ep-CAM an Signalprogrammen beteiligt, die mit der β-Catenin-assoziierten transkriptionellen Kontrolle und dem Differenzierungszustand von Epithelzellen verknüpft sind und dadurch die Organisation von Zellkontakten sowie die nachgeschaltete Genexpression beeinflussen. Eine veränderte EPCAM-Expression wird häufig in der Biologie epithelialer Tumoren und bei der metastatischen Progression beobachtet; zudem ist EPCAM an der Integrität epithelialer Barrieren und an stammzellähnlichen Phänotypen beteiligt. Diese Eigenschaften machen EPCAM zu einem nützlichen genetischen Knotenpunkt für die Untersuchung epithelialer Identität, Zellsortierung und transkriptioneller Netzwerke, die mit Transformation in Verbindung stehen.

Ep-CAM Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente EPCAM-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Ep-CAM Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der EPCAM-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Ep-CAM-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen EPCAM-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.