EOMES CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420182

概要

Eomes（EOMES）は、マウスの発生および免疫分化における細胞運命決定を統括するT-box型転写因子をコードします。EOMESは、中胚葉形成、胚発生初期のパターニング、系譜（リネージ）特異化を制御する転写プログラムを調節し、NK細胞やCD8+ T細胞応答を含む細胞傷害性リンパ球の成熟とエフェクター機能を形づくる経路における重要な結節点でもあります。クロマチン制御因子やサイトカイン駆動性シグナル伝達ネットワークとの状況依存的な相互作用を介して、EOMESは増殖、遊走、終末分化状態に影響を及ぼします。EOMES活性の破綻は、免疫恒常性の変化や発生表現型に関与すると示唆されており、発生学および免疫学における転写制御の機構研究に有用な標的となっています。

EOMES CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEomes遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Eomes内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Eomesのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EOMESタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EOMESシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Eomes欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EOMESの機能に不可欠なEomesエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Eomesゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EOMES CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびEOMES CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Eomes遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EOMES HDRプラスミド（m）および EOMES HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEomesホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEomes標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。