envoplakin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420248

概要

マウスのEvplは、重層上皮における角化被膜（cornified envelope）の組み立てと安定化に関与する、プラキンファミリーの細胞骨格リンカーであるエンボプラキン（envoplakin）をコードします。エンボプラキンはタンパク質間相互作用の足場として働き、中間径フィラメント、デスモソーム接着結合の構成要素、ならびに膜関連複合体を連結し、分化過程における表皮および粘膜バリアの完全性を支えます。細胞骨格の組織化と接着結合の成熟における役割から、EVPLは上皮の恒常性、創傷応答、ストレス誘導性リモデリング過程を解析するために一般的に用いられます。エンボプラキンを含む角化被膜タンパク質の発現や構造の変化は、バリア機能不全や炎症性皮膚表現型と関連づけられており、EVPLは上皮疾患の病態機序研究において重要な分子です。

envoplakin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEvpl遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Evpl内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Evplのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、envoplakinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、envoplakinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Evpl欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• envoplakinの機能に不可欠なEvplエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Evplゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• envoplakin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびenvoplakin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Evpl遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  envoplakin HDRプラスミド（m）および envoplakin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEvplホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEvpl標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。