Plasmide Double Nickase (h) Endophilin II: sc-401620-NIC

SH3GL1 code l’endophiline II, un adaptateur contenant un domaine SH3 qui couple la détection de la courbure membranaire à l’endocytose en recrutant des partenaires riches en proline et des modules de liaison aux lipides lors de la formation de vésicules médiée par la clathrine. L’endophiline II participe au recyclage des vésicules synaptiques et à l’internalisation des récepteurs, reliant le trafic membranaire au remodelage de l’actine et aux sorties de signalisation des récepteurs de facteurs de croissance et des récepteurs immunitaires. Par son rôle dans la dynamique des voies endocytiques et les réseaux d’interactions protéine–protéine, SH3GL1 a été étudié dans des contextes où le trafic vésiculaire influence la prolifération cellulaire, la différenciation et les réponses au stress. Une régulation altérée de SH3GL1 ou des événements de fusion ont été associés à des phénotypes de signalisation et de trafic pertinents pour les hémopathies malignes, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques en biologie du cancer et en fonction des cellules immunitaires.

Endophilin II Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SH3GL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SH3GL1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SH3GL1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SH3GL1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.