Endoglin/CD105 Double Nickase Plasmid (h): sc-400599-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Endoglin/CD105 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Endoglin/CD105 Double-Nickase-Plasmid (h) und Endoglin/CD105 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ENG abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Endoglin/CD105: sc-18838
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Endoglin/CD105 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400599-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Endoglin/CD105 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400599-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ENG kodiert Endoglin (CD105), einen transmembranen Korezeptor für Liganden der TGF-β-Superfamilie, der das Gleichgewicht der ALK1/ALK5-Signalübertragung und die nachgeschaltete, SMAD-abhängige Transkription moduliert. Endoglin wird stark auf proliferierenden Endothelzellen exprimiert und ist an der Regulation von Angiogenese, vaskulärem Remodeling, Dynamiken der extrazellulären Matrix sowie der endothelial-mesenchymalen Transition beteiligt. Über Interaktionen mit TGFBR2, ACVRL1 und assoziierten Signalkomplexen beeinflusst CD105 Programme der Zelladhäsion und -migration, die die Gefäßintegrität prägen. Eine fehlregulierte ENG-Funktion ist mit vaskulärer Pathobiologie verbunden, darunter die hereditäre hämorrhagische Teleangiektasie und tumorassoziierte angiogene Mikroumgebungen, wodurch ENG ein zentrales Ziel für mechanistische Untersuchungen in der Endothelbiologie ist.
Endoglin/CD105 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ENG-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ENG abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ENG-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ENG-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.