Plásmido CRISPR de Activación (h) Endoglin/CD105: sc-400599-ACT

ENG codifica endoglina (CD105), una glucoproteína transmembrana homodimérica que actúa como receptor accesorio dentro del complejo de receptores de la superfamilia TGF-β. Modula la señalización dependiente de SMAD aguas abajo de ligandos como TGF-β y las BMP, influyendo en la proliferación y migración de las células endoteliales, así como en la remodelación de la matriz extracelular durante la angiogénesis y la homeostasis vascular. La endoglina se expresa en niveles altos en el endotelio activado y en determinados compartimentos del estroma, lo que la vincula a procesos como el desarrollo vascular, la remodelación asociada a la inflamación y la señalización sensible a la hipoxia. La expresión o función desregulada de ENG se ha implicado en la biología de las malformaciones vasculares y en la neovascularización aberrante observada en múltiples contextos patológicos.

Endoglin/CD105 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ENG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Endoglin/CD105 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ENG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ENG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Endoglin/CD105. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ENG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Endoglin/CD105 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Endoglin/CD105 en células tumorales con expresión de ENG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.