Endo180 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403483

概要

MRC2 は Endo180（uPARAP とも呼ばれる）をコードしており、マンノース受容体ファミリーに属する膜貫通型のエンドサイトーシス受容体である。Endo180 はコラーゲンに結合して細胞内へ取り込み、リソソームで分解へ導く。Endo180 は、コラーゲンの代謝回転、インテグリン関連シグナル伝達、ならびにエンドサイトーシスに結び付いた輸送経路を制御することで、細胞外マトリックス（ECM）リモデリングを細胞接着や細胞移動と結び付けている。コラーゲン取り込みとマトリックス動態における役割を通じて、Endo180 は間質（ストローマ）の再構築や浸潤性の細胞表現型に寄与し、がん生物学、線維化、組織修復などの文脈でしばしば研究対象となる。MRC2/Endo180 活性の異常は、ECM 恒常性の変化や、疾患機序に関わる微小環境の変化と関連付けられている。

Endo180 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMRC2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MRC2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MRC2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Endo180タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Endo180シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MRC2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Endo180の機能に不可欠なMRC2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MRC2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Endo180 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびEndo180 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MRC2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Endo180 HDRプラスミド（h）および Endo180 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMRC2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMRC2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。