Enamelin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420174

Descripción general

Enam codifica enamelina, una glicoproteína secretada de la matriz extracelular esencial para la formación del esmalte dental en el ratón. La enamelina participa en la biomineralización del esmalte al regular la nucleación y el crecimiento de los cristales de hidroxiapatita, y al coordinar el ensamblaje y el procesamiento de la matriz del esmalte en colaboración con otras proteínas de la amelogénesis. Su actividad sostiene los procesos de depósito de matriz impulsados por los ameloblastos, la remodelación proteolítica y la maduración mineral que determinan el grosor del esmalte y su integridad estructural. La alteración de la función de ENAM se asocia con hipoplasia del esmalte y fenotipos tipo amelogénesis imperfecta, lo que la convierte en una diana útil para estudiar el desarrollo de tejidos mineralizados y los mecanismos de patología dental.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Enamelin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Enam en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Enam junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Enam tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Enamelin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Enam para la investigación de la señalización de Enamelin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Enam críticos para la función de Enamelin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Enam para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Enamelin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Enamelin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Enam. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Enamelin (m) y el plásmido HDR Enamelin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Enam para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Enam definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.