ENA-78 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405834

概要

CXCL5は、上皮性好中球活性化ペプチド78（ENA-78）をコードしている。ENA-78は上皮細胞および間質細胞から分泌されるCXCケモカインで、CXCR2シグナル伝達を介して好中球の走化性誘導と活性化を指揮する。ENA-78は、炎症細胞の動員、内皮細胞の挙動の調節、ならびにMAPKやNF-κBにより制御される転写プログラムに連動した経路を通じて、組織応答の協調に寄与する。CXCL5発現の制御異常は、複数の組織環境において、慢性的な炎症性微小環境、異常な白血球トラフィッキング、腫瘍関連炎症と関連づけられている。自然免疫シグナルのメディエーターとして、CXCL5は粘膜炎症、創傷応答、サイトカインネットワークのクロストークに関するモデルで頻繁に研究されている。

ENA-78 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCXCL5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CXCL5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CXCL5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ENA-78タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ENA-78シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CXCL5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ENA-78の機能に不可欠なCXCL5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CXCL5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ENA-78 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびENA-78 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CXCL5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ENA-78 HDRプラスミド（h）および ENA-78 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCXCL5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCXCL5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。