EN2/Engrailed 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420172

概要

Engrailed 2（EN2）はホメオボックス型転写因子で、発生期の中脳—後脳領域のパターン形成を助け、マウス中枢神経系における神経細胞の分化、軸索ガイダンス、領域アイデンティティのプログラムを制御します。EN2はホメオドメインを介してDNAに結合し、小脳および視蓋の発生を形作るFGFやWNTシグナルなどのモルフォゲン勾配の下流で働く転写ネットワークを統合的に調節します。EN2の発現量（ドーズ）や制御機構の変化は、神経発達の表現型や行動特性と関連づけられており、脳における遺伝子制御回路を研究するうえで有用な結節点となります。EN2はまた、神経前駆細胞の運命決定や回路形成に関わる転写制御を解明するためのマーカーおよび機構解析の入口としても用いられます。

EN2/Engrailed 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEn2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、En2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、En2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EN2/Engrailed 2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EN2/Engrailed 2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、En2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EN2/Engrailed 2の機能に不可欠なEn2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、En2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EN2/Engrailed 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびEN2/Engrailed 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、En2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EN2/Engrailed 2 HDRプラスミド（m）および EN2/Engrailed 2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEn2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEn2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。