EN2/Engrailed 2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420172

Visão geral

Engrailed 2 (EN2) é um fator de transcrição homeobox que ajuda a estabelecer o padrão da região do mesencéfalo–rombencéfalo em desenvolvimento e regula a diferenciação neuronal, a orientação axonal e programas de identidade regional no sistema nervoso central do camundongo. Ao se ligar ao DNA por meio do seu homeodomínio, o EN2 coordena redes transcricionais a jusante de gradientes de morfógenos, como as vias de sinalização FGF e WNT, que moldam o desenvolvimento do cerebelo e do teto (tecto). Alterações na dosagem de EN2 ou no seu controle regulatório têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e a traços comportamentais, tornando-o um nó útil para estudar circuitos de regulação gênica no cérebro. O EN2 também é usado como marcador e como ponto de entrada mecanístico para investigar o controle transcricional do destino de progenitores neurais e da formação de circuitos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO EN2/Engrailed 2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene En2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do En2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do En2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína EN2/Engrailed 2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de En2 para a investigação da sinalização de EN2/Engrailed 2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) En2 críticos para a função EN2/Engrailed 2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos En2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo EN2/Engrailed 2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo EN2/Engrailed 2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus En2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo EN2/Engrailed 2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR EN2/Engrailed 2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia En2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo En2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.