Plasmide CRISPR d'Activation (h) EMR1: sc-400698-ACT

ADGRE1 code EMR1, un récepteur d’adhésion couplé aux protéines G de la famille EGF‑TM7, principalement associé à la biologie de la lignée myéloïde. EMR1 participe aux interactions cellule‑cellule et aux processus de surveillance immunitaire, en intégrant des signaux extracellulaires à des voies de signalisation liées aux GPCR qui influencent l’activation des leucocytes, leur résidence tissulaire et les réponses inflammatoires. Son profil d’expression est largement utilisé pour étudier des phénotypes associés aux macrophages et aux éosinophiles, notamment la régulation des réseaux de cytokines et des programmes d’activation de l’immunité innée. Une signalisation myéloïde dérégulée et des états d’adhésion/d’activation altérés liés à EMR1 sont pertinents pour la recherche sur l’inflammation chronique, les microenvironnements immunitaires associés aux tumeurs et le remodelage tissulaire médié par l’immunité.

EMR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADGRE1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EMR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADGRE1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADGRE1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EMR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADGRE1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EMR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EMR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ADGRE1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.