EMMPRIN/CD147 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419369-ACT

Das Mausgen **Bsg** kodiert **EMMPRIN/CD147**, ein breit exprimiertes Glykoprotein der Immunglobulin-Superfamilie, das Zell-Zell-Interaktionen, den Umbau der extrazellulären Matrix und die metabolische Kopplung in verschiedenen Geweben reguliert. **CD147** fördert die Induktion von Matrix-Metalloproteinasen und unterstützt das Trafficking von Monocarboxylat-Transportern (**MCT1/MCT4**), wodurch Lactattransport mit glykolytischer Reprogrammierung und der Dynamik des Gewebemikromilieus verknüpft wird. Es ist an Prozessen wie Leukozytenmigration, angiogener Signalgebung und epithelial-stromalem Crosstalk beteiligt, was **Bsg** zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Entzündung, Fibrose und Tumor–Stroma-Interaktionen macht. Eine veränderte CD147-Aktivität wurde mit pathologischem Matrixumsatz und invasiven Phänotypen in Verbindung gebracht und ist damit mechanistisch relevant für Modelle der kardio-pulmonalen und renalen Biologie sowie der Krebsforschung.

EMMPRIN/CD147 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Bsg-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

EMMPRIN/CD147 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Bsg-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Bsg-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen EMMPRIN/CD147-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Bsg-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von EMMPRIN/CD147-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des EMMPRIN/CD147-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Bsg-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.