Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EMAP II CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420161
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- EMAP II CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（m）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してEMAP IIゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: EMAP II 抗体 (A-4): sc-393228
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
EMAP II CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m) | sc-420161 | 20 µg | $397.00 |
概要
Aimp1は、EMAP II（endothelial monocyte-activating polypeptide II：内皮細胞・単球活性化ポリペプチドII）をコードする遺伝子であり、tRNAマルチアミノアシルtRNA合成酵素複合体の構成因子AIMP1に由来する、サイトカイン様因子として最もよく知られる多機能タンパク質です。EMAP IIはストレス応答および炎症シグナル伝達に関与し、白血球の走化性、内皮細胞の応答、ならびに自然免疫過程のより広範な制御に影響を与えます。マウスモデルでは、Aimp1/EMAP II活性の変化が、アポトーシス、血管新生関連シグナル、組織リモデリングを制御する経路と関連づけられています。これらの過程の制御不全は、慢性炎症、腫瘍―免疫微小環境の生物学、血管機能障害の機序に関する研究において重要です。
EMAP II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAimp1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Aimp1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Aimp1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EMAP IIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、EMAP IIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Aimp1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- EMAP IIの機能に不可欠なAimp1エクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、Aimp1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- EMAP II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびEMAP II CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Aimp1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
EMAP II HDRプラスミド（m）および EMAP II HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAimp1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAimp1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。