Elongin B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402154

概要

ELOBはElongin Bをコードしており、Elongin BC複合体の中核構成要素です。Elongin BC複合体はE3ユビキチンリガーゼ複合体におけるアダプターとして機能し、伸長因子との相互作用を介して転写制御も支えます。フォン・ヒッペル＝リンダウ（VHL）ユビキチンリガーゼ複合体では、Elongin Bは基質認識とユビキチン化の過程を足場として支援し、低酸素シグナル、プロテオスタシス、細胞ストレス応答に影響を与えます。これらの役割を通じて、ELOBはタンパク質分解回転および転写と連動した経路の制御に関与し、腫瘍生物学や微小環境からの刺激への細胞適応に関連するプロセスに寄与します。Elongin BC関連複合体の撹乱は、がん遺伝子シグナル、ユビキチン依存的分解ネットワーク、転写制御に関する研究でしばしば検討されます。

Elongin B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるELOB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ELOB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ELOBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Elongin Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Elongin Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ELOB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Elongin Bの機能に不可欠なELOBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ELOBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Elongin B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびElongin B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ELOB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Elongin B HDRプラスミド（h）および Elongin B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはELOBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のELOB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。